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长沙地区诺如病毒小财神彩票的分布情况调查

时间:2014-08-21 来源:未知 作者:小韩 本文字数:1949字
论文摘要

  诺如病毒是引起急性胃肠炎的主要病因之一,在全球范围内,从儿童到成人都可能受到诺如病毒的感染,并可造成大规模流行。由于诺如病毒基因容易突变,其存在多种抗原的类型和基因型。

  根据诺如病毒的核苷酸序列的序列差异,可以把诺如病毒分为五个基因组类型,其中主要是 GI 和 GII感染人类。近年来,在全国不同地区间歇的爆发小规模的急性胃肠炎,特别是托儿所、幼儿园、养老院等人口密集且抵抗力较差的人群时有发生。本文通过检测急性胃肠炎病人粪便中诺如病毒的种类,来了解在长沙地区诺如病毒的分布情况,为以后防止病毒性胃肠炎提供依据。

  1 材料和方法

  1. 1 材小财神彩票料
  116 例粪便标本收集于长沙市病毒性腹泻患者。RNA 提取试剂、反转录试剂盒、PCR 所需试剂、DNA 纯化试剂盒均采购于 Invitrogen 公司。

  1. 2 方法
  1. 2. 1 病毒 RNA 提取 取 5g 粪便样品加入 100mL PBS 溶液中,使之充分震荡悬浮;10000 g / min离心 5 分钟,取上清保存在 -70℃冰箱备用。取上述制备的粪便悬液 140 uL,用 Trizol 提取病毒 RNA,保存于 - 70℃。(RNA 提取方法参照 Trizol 说明书)。

  1. 2. 2 逆转录反应 以提取的病毒 RNA 为模板,采用六核苷酸随机引物和 superscript II 逆转录酶进 行 逆 转 录。反 应 条 件 为: 30℃ 10min; 42℃30min; 99℃ 5min; 4℃ 5min。

  1. 2. 3 诺如病毒部分基因克隆 根据之前研究,采用两对引物 G1SKF 和 G1SKR,G2SKF 和G2SKR 分别克隆 GI 和 GII。PCR 反应条件:94℃变性 2min;94℃ 变性 30s,55℃ 退火 30s,72℃ 延伸 2min,35 个循环;72℃ 延伸 10 min。PCR 产物用 1. 2%琼脂糖凝胶电泳检验,纯化回收 320bp 左右的特异性扩增片段。回收的 DNA 片段克隆至PMD18 - T 载体测序。

  1. 2. 4 DNA 序列测定和分析 将扩增的片段和PMD18 - T 载体连接后,转化到 DH5a 细胞,挑白斑菌进行 RCR 鉴定,得到含目的片段的重组阳性菌株,用于测序分析。

  2 结 果

  从 128 个粪便样品中,成功检测到 63(49%)个阳性的样本。根据测序结果构建的系统进化树(表1 和图 1)所示,所有的诺如病毒样品全部属于 GII,其中 GII -4 检出率最高,是导致长沙地区病毒性胃肠炎最主要的诺如病毒株。【表1.图1】

论文摘要  
  3 讨 论

  本次调查诺如病毒 GII - 4 是引起长沙地区病毒性急性胃肠炎的主要病原体。此外,我们还发现了 GII -3,GII -12 这两种亚型的病毒株。值得注意的是本次发现的 GII - 4 病毒株的基因序列和之前在日本发现的一株 GII -4 诺如病毒很相似,但和在美国和欧洲发现 GII - 4 病毒株基因序列差别较大。这表明,根据不同的群体,诺如病毒变异产生的优势病毒株有所差异。同时,我们发现在诺如病毒衣壳蛋白的基因序列高度的可变性,表明衣壳蛋白对诺如病毒抗原特性,受体结合功能以及宿主特异性起着重要的作用。同源重组在诺如病毒之间十分常见,这也是诺如病毒不断进化出多种基因型的方法。因此,进一步的研究将重点关注诺如病毒基因组的分子进化动向,为以后控制和预防诺如病毒导致的疫情爆发提供帮助。

  参考文献
  
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